2005年，周秀娜以模特的身份参加动漫节，获得亚军。2006年，出演喜剧片《打雀英雄传》；6月，出演喜剧片《新扎师妹3》；同年，出演情景喜剧《老冯日记》。2008年，出演警匪动作片《花花型警》；11月，出演由叶念琛执导的爱情喜剧片《绝代双娇》。
2009年，6月出演由阮世生执导的喜剧电影《矮仔多情》，在片中饰演投资基金天王蓝子杰的未婚妻珠珠；10月，出演喜剧电影《死神傻了》；11月，出演惊悚电影《关人7事》，在片中饰演便利店的女店员秀娜。
2010年，3月与吕慧仪、黎诺懿等合作主演惊悚电影《恶胎》，在片中饰演心术不正的女护士郭少芳；7月，与钟欣潼、黄圣依等合作出演运动喜剧电影《出水芙蓉》，在片中饰演魔鬼队成员马阅；8月，与郭富城、张静初、吴京等合作出演变异人动作电影《全城戒备》，在片中饰演为了赢得上位与出名的目的女主播优优；10月，与杨千嬅、林峰等合作出演喜剧电影《完美嫁衣》，在片中饰演Perfect Wedding的婚礼统筹师Flora；11月，与蒋璐霞、元华等合作主演恐怖电影《僵尸新战士》，在片中饰演与人类友好相处的僵尸一族阿斯。
2011年，3月与曾志伟、杜汶泽合作主演喜剧片《猛男滚死队》；7月，与傅颖、罗仲谦等合作主演爱情电影《热浪球爱战》，在片中饰演从小生活在贝浪湾的Sharon；9月，与杨爱瑾、沈志明等合作出演爱情电影《喜爱夜蒲》；10月，出演由王晶、叶念琛执导的恐怖电影《猛鬼爱情故事》；12月，与罗仲谦、沈志明等合作主演爱情电影《婚前试爱》，在片中饰演郎琪。
2012年，1月与萧敬腾、曾志伟、赵正平等合作主演爱情动作喜剧电影《杀手欧阳盆栽》，在片中饰演娜娜；2月，与范逸臣、邓家佳等合作主演惊悚电影《夜店诡谈》，在片中饰演姊妹花艾米与艾丽；7月，主演由林小鑫执导爱情电影《猎音师》，在片中饰演性感、妖娆，亦正亦邪的吸血鬼小叶；8月，与杨幂、刘恺威等合作出演爱情悬疑电影《Hold住爱》，在片中饰演陶小磊的前女友方檬。
2013年，1月与林家栋、曾国珲等合作主演爱情电影《纸月亮》；1月21日，与方力申、李曼等联袂主演的古装悬疑剧《唐朝浪漫英雄》播出，在剧中饰演波斯商人的女儿陶夭夭，这也是周秀娜首次出演内地电视剧；2月，与蓝正龙、谢君豪合作主演惊悚电影《电梯惊魂》，在片中饰演与院长儿子林飞相恋的医院护士白洁；2月10日，出演由周星驰执导的古装神话电影《西游·降魔篇》上映，在片中饰演四煞；2月12日，与甄子丹、柯震东等合作出演的爱情电影《在一起》上映；2月24日，与郑嘉颖、韩雪等合作主演的年代剧《叶问》播出，在剧中饰演大杂院包租婆的女儿珍妮；2月25日，与AEG新亚洲娱乐签约；8月，与方力申、张馨予等合作主演爱情冒险电影《致命闪玩》，在片中饰演阿德的前女友Mina；9月，与杜汶泽、邹凯光等合作主演喜剧电影《烂滚夫斗烂滚妻》；9月22日，一直关注慈善事业的周秀娜，在电影《我想结婚的时候你在哪》的开机新闻发布会上，获颁“最美心灵艺术家奖”；10月，与李灿森、孙祖杨等合作主演惊悚电影《冷瞳》，在片中饰演内敛、端庄的富豪千金苏雨辰；12月，与袁咏仪、邱心志等合作主演爱情片《有招没招之爱情达人》；12月10日，主演由向灼执导的推理网剧《Xgirl》播出，在剧中饰演“人体测谎机”孙小美；12月13日，与汪东城、陈汉典等合作主演的时尚喜剧电影《我的美丽王国》上映，在片中饰演天资聪颖、内心纯真的模特周若童。
2014年，3月主演由钱升玮执导的东方爱情魔幻电影《非狐外传》，在片中饰演容貌出众，身份成谜的仙儿；6月，与郑伊健、王菀之合作主演爱情电影《不再说分手》，在片中饰演阿森的“永远对小姐”小岚；8月，主演由车径行执导的现代都市情感电影《我想结婚的时候你在哪》，在片中饰演婚纱设计师苏菲。
2015年，2月与古天乐、张翰等合作出演侦探喜剧电影《神探驾到》；9月，与郑中基、雨侨合作出演喜剧电影《猛龙特囧》；12月，与陈乔恩、孙艺洲等合作主演爱情电影《北京时间》，在片中饰演每天周旋在各种浮华诱惑之中的王小莫女友。
2016年，1月与吴镇宇、江疏影等合作出演喜剧片《恶人报喜》；1月6日，与辰亦儒、沈建宏等合作主演现代都市灵异类网络剧《美女公寓》播出，在剧中饰演流淌着妖怪血液的长腿辣妹沈亚桐；2月，与卢颂之、童冰玉等合作主演动作片《霹雳囧花》，在片中饰演性格强势，事业心重的女拳手阿宝；7月，与郑伊健、文凯玲等合作主演爱情网络电影《我的极品女神》，在片中饰演机器人iGirl001，她则凭借该片获得首届亚洲新媒体电影节最佳女演员奖。
2017年，与邓丽欣、乐基儿合作主演爱情电影《女士复仇》，在片中饰演生活温馨甜蜜的女飞贼Dior；2月，与胡定欣、刘心悠等合作主演古装宫廷剧《宫心计2：深宫计》，在剧中饰演李隆基的昭仪郑纯熙；5月，与金燕玲、郑欣宜等合演主演爱情电影《29 1》，在片中饰演保持身材，严格自律的自危派林若君。
2018年，1月4日周秀娜凭借电影《29 1》，获得第六届高登电影奖华语电影最佳女主角；2月，凭借电影《29 1》，获得第37届香港电影金像奖最佳女主角的提名；9月，受邀出席第六届十大华语电影表彰典礼，获得年度女演员奖；11月，出演动作悬疑电影《反贪风暴4》；12月，与张晋、戴夫·巴蒂斯塔等合作主演动作电影《叶问外传：张天志》。
2019年，4月与黄宗泽、吴卓羲、关智斌等合作主演警匪剧《战毒》，在剧中饰演毒后汪紫琪。
战毒2020-07-09 饰演汪紫琪 导演陈国华 主演黄宗泽、吴卓羲、关智斌、张雅卓、吴千语
宫心计2深宫计2018-5-21 饰演郑纯熙 导演梅小青 主演胡定欣
美女公寓2016-1-6 饰演沈亚桐 导演黄伟杰 主演辰亦儒、沈建宏
XGirl2013-12-10 饰演孙小美 导演向灼 主演张经伟、李昕岳、王茗
唐朝浪漫英雄2013-01-21 饰演陶夭夭 导演范小天 主演陈奕、沈建宏、方力申
十二星座发财梦 双子座-《猎音师》2012-07-23 饰演小叶 导演林小鑫、徐超、王博学 主演杨尚斌、郭子千、何佩瑜
叶问2012 饰演珍妮 导演范小天 主演郑嘉颖、韩雪、刘小锋
老冯日记2006 饰演Sharon(李灿森前女友) 导演冯德伦 主演冯德伦、梁汉文、陈子聪
反贪风暴4 2019-04-04 饰演廖雨萍 导演林德禄 主演古天乐、林峰
扫毒2之天地对决 2019 导演邱礼涛 主演古天乐、苗侨伟、应采儿
泄密者2018-06-15 饰演彭珍美 导演邱礼涛 主演吴镇宇、张智霖、佘诗曼
叶问外传：张天志2018 饰演娜娜 导演袁和平 主演张晋
小男人周记之吾家有喜2017 饰演BOBO 导演郑丹瑞 主演郑丹瑞
29 1 2017 饰演林若君 导演彭秀慧 主演郑欣宜
女士复仇2017 饰演Dior 导演火火 主演邓丽欣、乐基儿
我的极品女神2016-7-7 饰演iGirl001 导演王晶 主演郑伊健、文凯玲
霹雳囧花2016-02-26 饰演阿宝 导演卓韵芝 主演卢颂之、余小彤
恶人报喜2016-1-23 导演谷德昭 主演吴镇宇、郑中基、江疏影
北京时间2015-12-11 饰演王小莫女友 导演安占军 主演陈乔恩、孙艺洲
猛龙特囧2015-10-23 导演胡耀辉 主演胡耀辉、郑中基
神探驾到2015-2-6 导演黄百鸣、邱礼涛 主演古天乐、张翰
非狐外传2014-03-14 饰演仙儿 导演钱升玮 主演方力申、谈莉娜、林雪
有招没招之爱情达人 2013-12-27 导演智磊 主演袁咏仪、邱心志、李佳航
我的美丽王国2013-12-13 饰演若童 导演麦咏麟 主演汪东城、巩新亮、陈汉典
爆3俏娇娃2013-10-31 饰演宝 导演卓韵芝 主演卢颂之、余晓彤
冷瞳2013-10-31 饰演苏雨辰 导演蒋国权 主演孙祖杨、李灿森、张诗絮
烂滚夫斗烂滚妻2013-09-26 导演王晶 主演杜汶泽、邹凯光、彭浩翔
致命闪玩2013-08-30 饰演阿德女友 导演咸旭初 主演方力申、张馨予、李威
电梯惊魂2013-02-22 饰演白洁 导演宁敬武 主演蓝正龙、谢君豪、蔡鸿翔
在一起2013-02-12 饰演碧琪 导演霍耀良 主演甄子丹、柯震东、杨颖
西游·降魔篇2013-02-10 饰演四煞 导演周星驰 主演文章、舒淇、黄渤
纸月亮2013-01-17 饰演高诗琴 导演罗德明 主演林家栋、杨雁雁、梁拯康
我想结婚的时候你在哪2013 饰演女主角 主演郭品超、廖京生、李彬
兜售回忆2012-12 饰演女主角 主演诗雅、陈嘉桓
HOLD住爱2012-08 饰演方檬 导演张琦 主演杨幂、刘恺威、王骁
猎音师2012-07-16 饰演吸血鬼小叶 导演林小鑫 主演杨尚斌、郭子千、何佩瑜
夜店诡谈2012-02-10 饰演艾米 导演方亚熙 主演苑琼丹、范逸臣、邓家佳
杀手欧阳盆栽2012-01-06 饰演娜娜 导演李丰博、尹志文 主演萧敬腾、林辰唏、曾志伟
婚前试爱2011-12-08 饰演琪 导演叶念琛 主演罗仲谦、洪天明、杨梓瑶
猛鬼爱情故事2011-10-27 饰演宝 导演王晶、叶念琛 主演谢婷婷、罗仲谦、庄思敏
喜爱夜蒲2011-09-15 饰演娜娜 导演钱国伟 主演杨爱瑾、冼色丽、陈柏宇
热浪球爱战2011-07-07 饰演Sharon 导演邓东明 主演傅颖、罗仲谦、Jessica C
猛男滚死队2011-03-10 饰演Tina 导演王晶 主演曾志伟、杜汶泽、王晶
僵尸新战士2010-11-11 饰演阿斯 导演罗守耀 主演元华、钱小豪、蒋璐霞
完美嫁衣2010-10-22 饰演Flora 导演黄真真 主演杨千嬅、林峰、毛舜筠
全城戒备2010-08-06 饰演优优 导演陈木胜 主演郭富城、舒淇、邹兆龙
出水芙蓉2010-07-06 饰演马阅 导演刘镇伟 主演钟欣桐、黄圣依、方力申
恶胎2010-03-08 饰演Zoe 导演罗守耀 主演吕慧仪、黎诺懿、林雪
关人7事2009-11-05 饰演秀娜 导演彭发 主演江若琳、郑融、周柏豪
死神傻了2009-10-06 饰演方美芳 导演邱礼涛 主演谢安琪、陆永、周柏豪
矮仔多情2009-06-25 饰演珠珠 导演阮世生 主演王祖蓝、官恩娜、angelababy
绝代双娇2008-11-27 饰演思乐冰 导演叶念琛 主演邓丽欣、吴雨霏、梁志健
花花型警2008-02-28 饰演林朗女友 导演马楚成 主演余文乐、陈坤、钟嘉欣
新扎师妹3 2006-06-29 饰演模特儿阿明 导演马伟豪 主演薛凯琪、铃木仁、梁志健
人物获奖
2018-09-12 第六届十大华语电影年度女演员 （获奖）
2018-02-07 第37届香港电影金像奖最佳女主角奖 29 1 （提名）
2018-01-04 第六届高登电影奖华语电影最佳女主角 29 1 （获奖）
2016 第1届亚洲新媒体电影节最佳女演员奖 我的极品女神 （获奖）
2013 美国洛杉矶电影节最佳女主角 纸月亮 （获奖）
2012 尚趣时尚新锐大典荣膺“新锐跨界艺人大奖” （获奖）
2011 第47届芝加哥国际传播影视颁奖礼优秀女演员奖 （获奖）
2009 “Yahoo!搜寻人气大奖2009”颁奖典礼——图片搜寻次数最多的人物”及“娱乐焦点人物” 热浪球爱战 （获奖）
在周秀娜的身上找到了创作“林若君”这个角色初期的感觉，尤其是看到片场周秀娜专注的表演，完全把控住了这个角色的心里，让观众跟随着她的节奏一步步的体验到了影片想表达的喜怒哀乐。（导演彭秀慧评）
周秀娜性格爽朗，带点男孩子气。但她对爱情、婚姻观却很传统。（新快报评）周秀娜在电影《热浪球爱战》中，身着比基尼尽展飒爽英姿和性感魅力，而片中许多高难度的动作让她有更多机会展示其傲人的事业线与黄金比例的身材。（腾讯网评）
周秀娜凭借出色的演技与清纯甜美的外形赢得了观众的喜爱，而在电影《喜爱夜蒲》与《杀手欧阳盆栽》中也体现出了花瓶之外的成熟演技。周秀娜凭借其32、24、35的性感身材，被誉为性感女神“狄娜的接班人”。（网易娱乐评）
