1976年，开始从事表演艺术。
1977年，考入华东地区话剧培训班。
1979年，从江苏艺术学院表演系毕业，后被分配至江苏省话剧团工作。
1980年，出演个人首部电影《海之恋》；同年，参演电影《燕归来》。
1981年，参演农村题材电影《喜盈门》。
1982年，主演喜剧电影《烦恼的喜事》；同年，主演根据小说《浦江红侠传》改编的电影《开枪，为他送行》。
1983年，参演电影《青春万岁》；同年，主演爱情电影《快乐的单身汉》。
1984年，主演电影《代号213》；同年，主演根据曹禺同名话剧改编的电影《雷雨》。
1985年，主演电影《一个女演员的梦》。
1986年，主演电视剧《在水一方》。
1993年，主演喜剧电影《股市婚恋》；同年，主演电视剧《刑警风云》；随后，主演人物传记电影《叛逆大师刘海粟的故事》。
1996年，参演电影《长征》。
1998年3月4日，参演电视剧《周恩来在上海》；同年，参演古装电视剧《珍珠塔新传》。
1999年，参演电视剧《上海沧桑》；同年，主演都市言情电视剧《倾城之恋》。
2000年，主演电视剧《张闻天与刘英》。
2001年8月25日，出演根据王磊的小说《我是一只风筝》改编的电视剧《纸风筝》；同年，主演电视剧《西部的天空》。
2002年2月12日，主演悬疑电视剧《欲望的代价》；同日，参演古装历史题材电视剧《大唐情史》；8月30日，主演电视剧《故事2001》；12月5日，参演传记电视剧《张学良》。
2003年7月19日，参演电视剧《爸爸叫红旗》；12月19日，主演抗战历史题材电视剧《延安颂》。
2004年2月20日，参加谈话节目《艺术人生》；3月26日，参演电视剧《夫妻住对门》；8月12日，主演电视剧《非法智慧》。
2005年7月30日，主演人物传记电视剧《冼星海》；8月3日，参演电视剧《张伯苓》；11月10日，主演电视剧《神舟》；同年，主演古装电视剧《白鹭谣》。
2007年2月，参演电视剧《都市女人.com》的单元剧《命运有张脸》；10月11日，主演古装历史题材电视剧《日月凌空》；12月29日，主演电影《舟舟》。
2008年3月3日，主演人物传记电视剧《周恩来在重庆》；12月8日，主演电影《冰雪同行》。
2009年8月1日，参演电视剧《正义使命》；9月7日，主演革命历史题材电视剧《解放》。
2010年5月27日，参演人物传记电视剧《黄炎培》；8月11日，主演抗战题材电影《血染北沙河》；11月29日，主演革命历史题材《红七军》；12月14日，主演电视剧《解放大西南》。
2011年1月26日，参演电视剧《五星红旗迎风飘扬》；3月22日，参演革命历史题材电视剧《东方》。
2012年5月1日，主演抗战题材电视剧《密战太阳山》；同年，参演电影《毛遂自荐》。
2018年，出演话剧《繁花》第一季。
2019年，主演都市法制剧《因法之名》。
2021年4月13日，参演电视剧《武当一剑》。
2022年3月27日，出演近代历史传奇剧《一代洪商》；6月，出演电视剧《天下同心》。
2023年2月18日，参演的电影《油菜开花七寸心》在三明泰宁开机。
1986年《在水一方》饰演卢有文
1993年《刑警风云》饰演杜文迪
1998年《周恩来在上海》饰演瞿秋白
1998年《珍珠塔新传》饰演毕云显
1999年《开国领袖毛泽东》饰演溥先生
1999年《上海沧桑》饰演唐大浦
1999年《倾城之恋》饰演席杰
2000年《张闻天与刘英》饰演张闻天
2001年《纸风筝》饰演肖雨
2001年《西部的天空》饰演陈昊
2002年《张学良》饰演张大千
2002年《故事2001》饰演罗伟
2002年《欲望的代价》饰演刘思雨
2002年《大唐情史》饰演房遗直
2002年《回声》饰演张华南
2003年《延安颂》饰演蒋介石
2003年《爸爸叫红旗》饰演吕少雄
2004年《非法智慧》饰演陆翔风、陆翔云、大袋鼠
2004年《夫妻住对门》饰演郑智成
2005年《神舟》饰演仲令风
2005年《张伯苓》饰演张彭春
2005年《冼星海》饰演冼星海
2005年《白鹭谣》饰演钟正义
2007年《日月凌空》饰演李治
2007年《都市女人.com》饰演朱有为
2008年《周恩来在重庆》饰演蒋介石
2009年《解放》饰演蒋介石
2009年《正义使命》饰演陆平
2010年《解放大西南》饰演蒋介石
2010年《红七军》饰演张云逸
2010年《黄炎培》饰演蒋介石
2011年《大风歌》饰演张良
2011年《辛亥革命》饰演章太炎
2011年《旗袍旗袍》饰演蒋介石
2011年《小站风云》饰演高不吝
2011年《东方》饰演蒋介石
2011年《五星红旗迎风飘扬》饰演蒋介石
2012年《楚汉争雄》饰演张良
2012年《五星红旗迎风飘扬2》饰演蒋介石
2012年《密战太阳山》饰演钱国义
2012年《雾都》饰演陈瑜
2012年《红军东征》
2013年《毛泽东》饰演蒋介石
2013年《寻路》饰演蒋介石
2013年《新西厢记》饰演慧明
2014年《铁血红安》饰演李坪山
2014年《长沙保卫战》饰演蒋介石
2014年《天使的微笑》饰演韩程中
2015年《生死翻盘》饰演法隐
2015年《太行山上》
2016年《淬火成钢》饰演蒋介石
2016年《海棠依旧》饰演蒋介石
2016年《东方战场》饰演蒋介石
2016年《天涯浴血》饰演蒋介石
2016年《彭德怀元帅》饰演蒋介石
2016年《红星照耀中国》饰演蒋介石
2017年《风筝》饰演蒋介石
2017年《女儿红》饰演周万泉
2018年《诚忠堂》饰演潘为严
2018年《换了人间》饰演蒋介石
2018年《民族记忆》饰演蒋介石
2019年《外交风云》饰演蒋介石
2019年《伟大的转折》饰演蒋介石
2019年《特赦1959》饰演蒋介石
2019年《永远的战友》饰演蒋介石
2019年《因法之名》饰演许志逸
2020年《跨过鸭绿江》饰演蒋介石
2020年《二毛驴传奇》饰演蒋介石
2021年《武当一剑》饰演无相
2021年《人民的选择》饰演蒋介石
2021年《重庆谈判》饰演蒋介石
2022年《破晓东方》饰演蒋介石
2022年《一代洪商》饰演罗积善
1980年《燕归来》饰演谢峰
1980年《海之恋》饰演南下
1981年《喜盈门》饰演仁武
1982年《开枪，为他送行》饰演梅羽宽
1982年《烦恼的喜事》饰演何志
1983年《快乐的单身汉》饰演刘铁
1983年《青春万岁》饰演苏君
1984年《雷雨》饰演周萍
1984年《代号213》饰演肖剑峰
1985年《一个女演员的梦》饰演沙晓舟
1993年《叛逆大师刘海粟的故事》饰演刘海粟
1993年《股市婚恋》饰演陈阿奈
1996年《长征》饰演博古
2005年《生死牛玉儒》饰演沈户得
2007年《舟舟》饰演舟舟的父亲
2008年《冰雪同行》饰演覃叔
2008年《缘来是爱》饰演张校长
2010年《血染北沙河》饰演张宣武
2011年《飞天》饰演大总师
2012年《扎西1935》饰演蒋介石
2012年《忠诚与背叛》饰演蒋介石
2012年《毛遂传奇》饰演吕不韦
2013年《雷锋的微笑》饰演杂志社主任
2013年《妈妈们的青春往事》
2013年《风云1927》
2015年《百团大战》饰演蒋介石
2015年《开罗宣言》饰演蒋介石
2016年《遵义会议》饰演蒋介石
2016年《罗曼蒂克消亡史》
2017年《血战湘江》饰演蒋介石
2018年《浴血广昌》
2019年《决胜时刻》饰演蒋介石
马晓伟在二十世纪七八十年代，连续拍了近20部电影，有影响的有《海之恋》、《喜盈门》、《雁归来》、《开枪，为他送行》、《雷雨》、《快乐的单身汉》等，很受当时观众的欢迎，他也因为扮演农民、工人、知识分子等角色被坊间称为“北有唐国强，南有马晓伟”，“白马王子”的称号一直跟随他多年。马晓伟是一名比较特殊的特型演员，他既演过蒋介石，又演过毛泽东(《国母宋庆龄》)，相对于其他的特型演员，马晓伟扮演的蒋介石极为神似，几乎可以达到以假乱真的效果。马晓伟在《解放》、《东方》、《延安颂》、《周恩来在重庆》等剧中出演蒋介石，得到了圈内人士和观众的认可，马晓伟也被誉为“中国饰演蒋介石第一人”。（搜狐娱乐评）
20世纪80年代初期在中国电影界崭露头角的男演员当中，马晓伟曾经与唐国强、朱时茂、郭凯敏并称“四大小生”。他拥有阳光大男孩般的灿烂笑容，在银幕上一连塑造了或文雅或憨厚、或耿直或内敛、或沉稳或忧郁的时代青年形象，他不断突破饰演单一小生的界限，著名电影《雷雨》中性格复杂多变的大公子周萍、电视剧《延安颂》中让人耳目一新的蒋介石形象都使人对他的演技刮目相看。（《大众电影》评）
