妻子夏雪罹患癌症，令丈夫顾振生备受打击，在巨大压力下，经他手术的病人不幸身亡。顾振生从此一蹶不振，精神恍惚，时常能看到诡异和恐怖的景象。与之类似，夏雪的妹妹夏晓雨近一段时间也被噩梦所困扰，精神几近崩溃。为了带晓雨走出阴影，顾振生拜托精神科医生麦翔昱为其治疗。麦翔昱为人圆滑自私，此前曾与女护士吴心瑶相恋，为攀援富贵转而追求院长的女儿温淼。是时，314病房闹鬼的传闻甚嚣尘上，在鬼怪的阴影下，古老的背叛与忠贞的故事慢慢上演。
任达华Simon Yam 饰 顾振生
吴镇宇Francis Ng 饰 麦翔昱配音 陈浩
姚笛Di Yao 饰 吴心瑶
杨渝渝 饰 夏晓雨
李念Nian Li 饰 温淼
刘雨鑫Yuxin Liu 饰 夏雪
巴多Duo Ba 饰 洪大爷
杨舒婷Shuting Yang 饰 林芗
李兆民Zhaomin Li 饰 温院长
张风Feng Zhang 饰 刘达华
演员 任达华
外科医生顾振生，内心压抑。在爱妻死后，饱受思念折磨，家中器物都保持妻子在世时的原样。为了弥补妻子“死无全尸”的愧疚，顾振生开始了一场煎熬的情感战。悲痛之余还要照顾频临崩溃的“小姨子”杨渝渝，两颗脆弱的心相互依靠，共同寻找着精神支柱。
演员 吴镇宇
心理医生麦翔昱因出国深造，与现任女友吴心瑶分手，在国外学习的一年中，与温淼邮件传情两人确定了恋爱关系。吴心瑶的嫉妒偷窥，导致其和麦翔昱关系的恶化。麦翔昱夜也偷窥别人，俨然变身为“偷窥者” 。
演员 姚笛
护士吴心瑶，和医生麦翔昱有过一段感情，分手后因为不能接受麦医生有了新女友而进行种种报复行为。她看似温柔的外表下心机沉重，不动声色间的举动让人不寒而栗。
1、无论怎么说，一个400多万制作成本的小成本电影，最终的实际票房却高达3200万，这并不包括其他各种版权的收入，该片不仅仅创造了惊悚类型片的最高票房纪录，也成为了名副其实的票房标杆，其票房收益比超过1：6，这是不争的事实。（北青网）
2、该片在中国国产恐怖片中实属罕。而且不少看过该片的影评人等业内人士都给予该片很高的评价，称其代表了中国恐怖片当时的最高水平。《午夜心跳》秉承了亚洲恐怖片一贯的悬疑推理风格，以连环杀人案为主体，带领观众寻找杀人凶手，考验逻辑推理能力。除此之外，《午夜心跳》吸收了欧美电影中常见的“重口味”元素，随风浮动的窗帘渗出鲜血、手持利刃的阴毒护士面露杀气、美女护士值班惨遭杀害、红衣女鬼午夜纠缠主角等，尽显暴力血腥元素。而且，电影根据故事节奏采用震撼配乐甚至不惜真人发声，冲击耳膜。两种截然相反的风格的结合，使得《午夜心跳》恐怖元素更加多样化，有望挑战史上“最刺激”鬼片。（搜狐娱乐）
1、《午夜心跳》这部电影是模仿日式恐怖，效果处理的很不错，算是国产恐怖片的一大进步了，包括道具、镜头运用、光影、氛围营造等，还是下了些功夫的。
2、《午夜心跳》这部电影名字起得不错，很专业，也很到位，一方面，以是午夜发生的事情作为引子，扣人观众心弦，突出刺激恐怖的情节；别一方面影片中的情节都以心脏作主题，既不离题也令人期待。总体上感觉还是比较好的， 至少情节比较曲折，虽然有些情节的产生有点莫名其妙，不过也是为了整部电影的衔接作铺垫，是无可厚非的。
1、剧组在拍摄一场医院门口的过场戏时，遭遇了现场灯光的“戏弄”。每当导演喊下：“开拍！”的时候，灯都会突然灭掉，即便工作人员再次打开，灯也会在“开拍”的命令发布后主动熄灭。
2、戏中太平间是由一间废旧锅炉房改造，房内旧管道会时不时发出声响，极其吓人。尤其在拍摄一场巴多于太平间煮肉的戏时，怪声不绝于耳，严重影响了演员的心情。无奈之下，张加贝急忙再次烧香拜佛。
3、杨渝渝在和“姐姐”合演对手戏时，她甚至不敢看片中“女鬼”的扮相。
4、性格火辣在圈内号称“麻辣女郎”的杨渝渝坦言原本认为自己胆子很大，但拍戏时都不敢照镜子。虽然有很多工作人员在场，但心里还是很忐忑，只要闭上眼睛脑中想的都是“女鬼”苍白的脸孔和凹陷的眼球。
5、影片的两款海报被指分别抄袭了泰国恐怖片《鬼5虐》和美国恐怖片《恶灵空间》。
《午夜心跳》大量采用同期声，并后期加工，音效的采集是影片中最耗时的部分也是最难制作的。
《午夜心跳》中大部分桥段没有选取配乐，而是充分利用了同期声，力求影片的生活性和真实性。
